目的：探讨短串联重复序列（STR）基因座突变在亲子鉴定中的发生规律及其对鉴定结果的影响，优化突变判定标准。方法：研究时间为2024年05月至2025年05月，纳入500例涉及亲子鉴定的家庭，采用PCR-CE技术检测30个STR基因座，分析突变率、突变类型分布、突变位点特征、突变与亲代年龄及性别的关联性，以及突变对亲子指数（PI）的影响。检测数据通过卡方检验和Logistic回归分析，统计学差异以P<0.05为显著性标准。结果：共检出46例突变，总突变率为0.31%（46/15000），父源突变占比62.50%（29/46），母源突变占比37.50%（17/46），差异有统计学意义（χ²=5.82，P<0.05）。突变集中于D21S11（19.57%）、D18S51（15.22%）及FGA（13.04%）基因座。亲代年龄≥35岁组突变率（2.41%）显著高于<35岁组（1.21%）（P<0.05），而性别差异无统计学意义（P>0.05）。单步突变占比89.13%（41/46），两步及以上突变占10.87%（5/46）。经调整判定阈值后，排除错误风险降低，PI值≥10000的案例占比从98.20%提升至99.52%。结论：STR基因座突变以父源单步突变为主，且与亲代年龄显著相关；通过优化突变判定阈值可提高亲子鉴定结果准确性，降低误判风险，对临床鉴定标准完善具有实践意义。